譯者的話：

人員入場隔離期多長時間合適？4 晚、7天、14天？在即將來臨的低價低利潤養(yǎng)殖時期，任何成本的浪費或者冗余都會降低企業(yè)的競爭力，隔離期的長短不僅僅是勞務成本的增加，相應隔離設(shè)施、檢測、物流成本也會增加。本實驗在長達近四年觀察監(jiān)測期中，多角度的對比不同生物安全措施/等級和隔離期對藍耳?。绹咧虏⌒远局辏┖蜌獯鞑サ挠绊懀?/span>14-16個小時的淋浴更衣?lián)Q鞋+隔離是可以阻斷藍耳病毒和氣喘病的傳播的，累計45分鐘的淋浴更衣?lián)Q鞋隔離期在短期對比實驗中也顯示了有效性。這個實驗結(jié)果是對既往較長的隔離期的一種挑戰(zhàn)，也是對包括非瘟在內(nèi)其他疫病的隔離期的設(shè)定的一種思考，拋玉引玉，期待著國內(nèi)有類似的研究信息共享。

同行評審

一晚的隔離時間可以防止豬繁殖和呼吸綜合癥病毒和豬肺炎支原體通過人員和污染物( 靴子和工作服)傳播

作者Authors

Andrea Pitkin, MS

Satoshi Otake, DVM, PhD

Scott Dee, DVM, MS, PhD, Diplomate ACVM

概要

本文總結(jié)了長達4年( 1438天) 的觀察記錄，關(guān)于一晚的隔離時間對防止豬繁殖和呼吸綜合征病毒和豬肺炎支原體通過人員和污染物在豬群間機械傳播的能力。結(jié)論十分令人驚訝！

關(guān)鍵詞： 豬，豬繁殖和呼吸綜合癥，隔離，人員，污染物

長時間限制與其他豬群接觸過的人員進入養(yǎng)豬場的做法( 隔離)是全球養(yǎng)豬業(yè)中一個極具爭議的話題。多年來，盡管缺乏數(shù)據(jù)來支持這些隔離時間的科學性，但為了減少人員將病原體引入農(nóng)場的風險，豬場都在實施從48小時到96小時不等的隔離時間。在文獻中，Sellers[1]等人調(diào)查了人們接觸感染豬只后攜帶口蹄疫病毒的能力。結(jié)果表明，在暴露后28 小時，一個人的鼻拭子陽性，但在暴露后48小時，沒有出現(xiàn)陽性。然而，嘗試復制這些結(jié)果的并沒有成功[2]。同樣，Amass [3]等人報道，在接觸感染豬5 和24小時后，可分別從指甲沖洗和鼻拭子重獲豬繁殖和呼吸綜合征病毒(PRRSV) 的RNA。然而，在這些樣本中PRRSV 的生存能力沒有被證實，也沒有觀察到傳染陰性哨兵豬。最后，Otake[4]等人從接觸感染動物的人員的手、靴子和工作服中重獲了傳染性的PRRSV 病毒，并證明傳染給了陰性哨兵豬。然而，這項研究還表明，在不考慮隔離的情況下，基本的衛(wèi)生干預措施，如淋浴、更換衣服和鞋類，可以防止PRRSV 的機械傳播[4]。總之，這些數(shù)據(jù)對延長隔離時間的價值提出了挑戰(zhàn)；因此，為了更好地理解這一風險，我們總結(jié)了關(guān)于一晚的隔離時間防止豬繁殖和呼吸綜合癥病毒(PRRSV) 和豬肺炎支原體(Mhyo)通過人員和污染物( 靴子和工作服)從感染豬群向易感豬群傳播能力的觀察。

材料和方法

本研究采用明尼蘇達大學動物護理和使用委員會批準的方案進行。

設(shè)施

我們的觀察記錄與一項為期4 年（2006-2010）的PRRSV和Mhyo在豬疾病凈化中心生產(chǎn)區(qū)域模型( 明尼蘇達州圣保羅)進行的區(qū)域傳播和生物安全性評估相結(jié)合[5,6]。在本報告中，我們將重點關(guān)注在為期4 年的區(qū)域傳播和生物安全項目中使用的三個設(shè)施的活動：豬群本身、場內(nèi)人員住所和高級別生物安全的豬舍( 圖1)。

該豬群為300 頭25- 120公斤的豬只，這些豬只在1 - 4年內(nèi)試驗接種了PRRSV MN-184，在2 - 4內(nèi)年試驗接種了Mhyo菌株232[5,6]。這是一個持續(xù)流通的豬群，因此，在整個四年的研究期間，該設(shè)施從未被清空。新到的豬只，大約6 到8周齡，每2到4周進入該設(shè)施，這取決于當前研究的實驗設(shè)計[5,6]。新進豬只被放置在與現(xiàn)有豬群相鄰的圍欄中，允許鼻子對鼻子的接觸，使得病原體從被感染的動物傳播到未感染的動物。在整個研究過程中，記錄了豬群呼吸系統(tǒng)疾病的臨床癥狀以及PRRSV 和Mhyo在豬群內(nèi)的排毒情況，發(fā)現(xiàn)年死亡率為1 0% - 12%[5,6]。

現(xiàn)場住所是豬病凈化中心的一所房子，作為工作人員的淋浴進出設(shè)施，以及一處農(nóng)場專用衣物的洗滌和鞋類的消毒場所。

最后，這個高級生物安全設(shè)施有10 只豬，它們在整個項目期間無PRRSV 和Mhyo感染。這一設(shè)施使用的是豬群全進全出原則；因此，第1 年每2周一次(1年共26批豬)，第2 - 4年每4周一次(2 - 4年共39批豬)都有新一批豬進入。該設(shè)施的生物安全計劃包括一系列經(jīng)過科學驗證的干預措施，針對PRRSV和Mhyo的所有直接和間接傳播途徑，包括一個空氣過濾系統(tǒng)，旨在防止引入受PRRSV和Mhyo污染的生物氣溶膠[5-7]。

時間周期和活動事項

同樣，本著本報告的目的，我們將重點關(guān)注在為期4 年的區(qū)域傳播和生物安全項目中每天發(fā)生的三個具體事項周期：污染期、清潔和隔離期以及監(jiān)測期。污染期大約每天發(fā)生在中央標準時間(CST) 下午2點到4點之間。這段時間的目的是讓研究人員接觸受PRRSV和Mhyo 感染的動物。在污染期間，工作人員進入該設(shè)施的所有11 個大欄內(nèi)，在那里他們飼喂動物、清理大欄地板、治療病豬、移走死豬并完成必要的維修工作。在一個常規(guī)的工作日里，會有一到兩個人進入每個設(shè)施。每個月，工作人員還標記并銷售育肥豬，并對豬群進行抽樣，以檢測PRRSV 和Mhyo的狀態(tài)。每天污染期結(jié)束后，工作人員離開設(shè)施，并開始清潔和隔離期。

清潔和隔離時間在污染期之后立即開始，大約從下午4 點持續(xù)到第二天上午6 點，中央標準時間(CST)。這個時期的目的是中和污染期的影響。在此期間，工作人員從豬場去往住所，在那里他們脫掉農(nóng)場的衣服和鞋，洗澡，穿上自己的衣服和鞋子，并從當天下午大約4 點到第二天早上大約6點避免與豬接觸。用7%戊二醛和26%季銨鹽(辛力加；國際保護協(xié)會，亞特蘭大，喬治亞) 對衣物和鞋類進行消毒。第二天中央標準時間(CST) 大約早上5:30，工作人員再次洗澡，穿上干凈的農(nóng)場專用服裝衣物和鞋子，進入高生物安全級別的設(shè)施內(nèi)，開始監(jiān)測階段。

監(jiān)測期是與該報告有關(guān)的第三個也是最后一個事項期，監(jiān)測時間為每天中央標準時間(CST) 上午6 時至8時，在該高生物安全設(shè)施內(nèi)進行。這個時期的目的是衡量在清潔和隔離期間所采用的做法的有效性。具體來說是測量兩個結(jié)果：對人員進行PRRSV 和Mhyo檢測，以及檢測設(shè)施中飼養(yǎng)的哨兵豬的PRRSV-Mhyo 狀態(tài)。清潔和隔離時間結(jié)束后，工作人員立即從住所前往距離約100 米的高級別生物安全設(shè)施。進入設(shè)施專用接待室后，立刻進行拭子檢查，以確定人員、衣物和鞋類上是否存在PRRSV RNA 或Mhyo DNA。為了收集樣本，滌綸拭子(Fisher Scientific, Hanover Park, Illinois)浸入含有3%胎牛血清的微量培養(yǎng)基(MEM)中(Difco, Detroit, Michigan)，并以“之”字型在每個人的頭部、面部、頸部、軀干、手、手臂和腿上滑動擦拭。然后將拭子保存在-20 ℃的MEM 中，直到收集后24 - 48小時進行實驗室分析，以保持病毒完整性并最大化檢測敏感性。取樣后，穿上設(shè)施專用的靴子、工作服和手套，并用7%的戊二醛和26%的季銨鹽對靴子進行消毒。工作人員隨后進入豬群內(nèi)，喂豬，打掃圍欄。此外，每周對這10頭豬進行健康診斷評估，包括對呼吸道疾病的臨床癥狀進行目視觀察，對所有10頭豬進行血液檢測和鼻腔擦拭。在采集之后，明尼蘇達大學獸醫(yī)診斷實驗室(明尼蘇達圣保羅MN VDL)通過聚合酶鏈反應(PCR)對人員、污染物和動物的所有樣本進行了PRRSV RNA和Mhyo DNA的檢測[8,9]

控制組Controls

除了每天對動物、人和無生命物體采樣，還進行了兩套控制實驗，即PRRSV 擴散控制和PRRSV隔離期控制。這些控制不包括Mhyo，因為它們是在研究的第一年執(zhí)行的，那時PRRSV 是之前在豬群中接種的唯一病原體。

傳播控制的目的是記錄PRRSV 是否通過人員和污染物接觸感染動物后傳染給哨兵豬(圖2)。在連續(xù)5天內(nèi)，1人接觸了豬群內(nèi)的感染動物，然后在不經(jīng)過任何基本清潔措施( 淋浴、洗手、換工作服和靴子)的情況下到高級別生物安全設(shè)施中立即接觸了陰性哨兵豬(10 頭6至8周大的豬)。

隔離期的控制的目的是記錄人員和污染物所造成的PRRSV 傳播是否可以通過基本的清潔措施來防止( 圖3)。連續(xù)5天，有1名人員在豬群中接觸了感染的豬，然后立即去往高級別生物安全設(shè)施接觸哨兵豬，那里有10 頭6至8周齡的陰性哨兵豬。在進入高級別設(shè)施之前，這名人員在接觸不同組的豬之間都會洗澡，更換工作服和靴子，但沒有遵守指定的隔離時間。對照組被分開圈養(yǎng)，以防止直接和間接接觸。

按照上述情況進行日常動物護理，使每組動物和工作人員之間有廣泛的身體接觸。此外，如前所述，在指定地點采集日常工作人員拭子和污染物拭子( 圖2和圖3)。另外，兩個對照組的哨兵豬在第0 天(抵達哨點設(shè)施時)、第5天(5天接觸期結(jié)束時)和第20天(接觸期結(jié)束后15天)進行了血液檢測。在MN VDL通過PCR檢測血液樣本是否存在PRRSV RNA。

圖1 ：各設(shè)施及人員日常流動示意圖。

研究人員每天在現(xiàn)場住所淋浴并穿上干凈的衣服和鞋子，之后進入高級生物安全設(shè)施( 空氣過濾的)，穿上干凈的衣服和靴子并洗手，然后進入有豬的區(qū)域，這些豬是豬繁殖和呼吸綜合征病毒(PRRSV) 和肺炎支原體(Mhyo)的雙陰性豬。在與動物接觸之前，采集手上、工作服和靴子上的拭子，用聚合酶鏈反應檢測PRRSV RNA 和Mhyo DNA。在完成動物護理任務后，工作人員進入豬場，那里有300 頭感染了PRRSV和Mhyo的豬只。完成動物護理工作后，工作人員重新進入住所，他們在那里洗澡，穿上干凈的衣服，并保持1 晚不接觸動物。第二天早上，重復此過程。這種人員流動模式重復了1438天。

圖2 ：豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV) 傳播控制實驗中的人員流動總結(jié)圖。

該實驗的目的是證明在沒有特定生物安全控制的情況下，PRRSV 可以通過人員和污染物從受感染的豬群傳播到陰性豬群。對照實驗連續(xù)進行5 天，每天在進入高級別生物安全設(shè)施時從手、工作服和靴子上采集棉拭子，并用聚合酶鏈反應檢測PRRSV RNA 。

圖3 ：豬繁殖和呼吸綜合征病毒(PRRSV) 隔離期控制實驗中的人員流動總結(jié)圖。

該實驗的目的是記錄是否可以采取基本的衛(wèi)生措施來防止通過人員和污染物造成的PRRSV 傳播?？刂品桨高B續(xù)進行了5天，包括人員在淋浴和更換衣服和鞋類后從PRRS陽性豬群直接前往高級生物安全設(shè)施。在進入后一個設(shè)施時，采集手、工作服和靴子上的拭子，并通過聚合酶鏈反應檢測PRRSV RNA 。

結(jié)果

在為期1438 天的研究期間，共有25名人員參與了上述設(shè)施之間的活動。分別采集和檢測了7174個人員樣本和4833 個污染物樣本（PRRSV RNA 和Mhyo DNA檢測）。在4 年的研究期間，所有拭子均為PCR陰性，且高水平生物安全設(shè)施中飼養(yǎng)的所有動物( 480只)均為PRRSV陰性和Mhyo陰性。清潔和隔離時間每天大約持續(xù)14 至16小時。

在擴散控制實驗中，觀察到PRRSV 的二次機械傳播是由接觸受污染的人員和污染物引起的。暴露第5天，10個哨兵豬中有5個PRRSv 陽性，而暴露第20天，10個哨兵豬中有10個PRRSv 陽性。此外，在與豬群中的受感染動物接觸后進入高生物安全設(shè)施時采集的人員和污染物標本，其中45 個棉簽中有40個檢測到PRRSV RNA。

相反，PRRSV在隔離控制期內(nèi)到哨兵豬的傳播被阻止，因為所有哨兵豬在測試期間保持PRRSV 陰性。在所有5天暴露時間中，直到離開豬群，在人員和污染物的45 個棉拭子中有42 個檢測到PRRSV RNA。在淋浴和更換靴后進入哨兵豬設(shè)施時采集的所有拭子(45 / 45) 均為PCR陰性。不同組的豬只間，人員洗澡、換工作服和靴子的時間大約是45 分鐘。

討論

在撰寫本報告所用的條件下，隔離時間為1 晚(持續(xù)14至16小時)防止了PRRSV和Mhyo在感染豬群和易感豬群之間通過人員和污染物傳播。雖然這些信息本質(zhì)上是觀察得出的，并且是在模型條件下收集的，但它對延長隔離時間的有效性提出了挑戰(zhàn)。

另外，雖然以前報道過關(guān)于數(shù)據(jù)描述污染物和人員機械傳播PRRSV 的能力[4,5]，以及降低這些風險的干預策略的研究，但這項新研究是新穎的和嚴謹?shù)?，因為這些觀察是經(jīng)過一段長時間收集的，涉及眾多人員，采用廣泛的基于抗原的取樣程序，包括一組基于PRRSV 的控制實驗。

遺憾的是，由于研究設(shè)計的限制，大量的對照，以及一組Mhyo 對照，不能包括在內(nèi)。此外，本研究不需要采集人員的鼻拭子。這一決定是基于之前的一項研究中[3]，從人類鼻腔樣本中重獲的PRRSV RNA 僅限于暴露48小時后收集的單個樣本。這是作者的觀點，如果這的確是一個真實的結(jié)果，那么我們預期檢測到的頻率將更大，最初檢測到的時間應該發(fā)生在暴露后的早期，而病毒也會在更多的研究人員身上被檢測到。最后，由于我們的研究周期很長，而且過程的侵入性，因此不可能在如此多的參與者中強制執(zhí)行。

總之，盡管這些觀察結(jié)果很有趣，并且有潛力提高養(yǎng)豬業(yè)人員隔離政策的有效性，但顯然還需要更多的研究來調(diào)查和澄清這個問題。例如，由于這些觀察結(jié)果僅適用于PRRSV 和Mhyo，我們不知道它們是否可在其他病原體中使用，如豬圓環(huán)病毒2 型或豬流感病毒。最終，我們也沒有確定防止病原體傳播所需的最短隔離時間?；谶@些關(guān)于PRRSV和Mhyo的觀察，任何時長的隔離都可以被認為是“浪費的時間”。但是，由于我們的對照使用不包括Mhyo ，所以在沒有更多數(shù)據(jù)的情況下，我們?nèi)詿o法得出任何肯定的結(jié)論。

理想情況下，如果未來的研究可以回答這些問題，并且可以在整個行業(yè)的決策者之間進行有組織的討論，也許可以在行業(yè)領(lǐng)導者之間達成一致，從而形成一個國際性的隔離計劃。在此之前，我們希望從該報告中得到的觀察將會在早期的適應者之間發(fā)起討論，指導決策制定，并促進那些已經(jīng)被這些數(shù)據(jù)說服的人所擁有和操作的體系之間的變化。