日本專家建立了可用于分離非洲豬瘟病毒的永生化豬腎巨噬細胞細胞系

非洲豬瘟病毒(ASFv)是導致非洲豬瘟的病原體，可以導致一種家豬和野豬出血性的烈性致死傳染病。該病毒主要感染不能在體外生長的豬巨噬細胞和豬單核細胞。盡管近年來許多科學家就建立一個可以穩(wěn)定的可用于非洲豬瘟病毒分離的細胞系做出了諸多努力，但是這些細胞系僅支持有限的低病毒復制水平并且大部分是人工減毒的毒株。

近期發(fā)表在《自然》雜志上的最新研究進展為非洲豬瘟病毒分離提供了可能的新的思路。日本動物衛(wèi)生研究做評估了新型永生化豬腎巨噬細胞(IPKM)支持非洲豬瘟病毒感染的能力。研究證明IPKM細胞系可促進非洲豬瘟病毒(Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株和Espana75毒株)高水平復制(>107.0TCID50/mL)。接種豬肺泡巨噬細胞(PAM)后可觀察到紅細胞吸附實驗和細胞病變。實驗結(jié)果證明IPKM可作為非洲豬瘟病毒分離、復制、基因操作和疫苗生產(chǎn)等研究的備選細胞系。

研究發(fā)現(xiàn)

01 IPKM對非洲豬瘟病毒易感

非洲豬瘟病毒(Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株和Espana75毒株)接種IPKM細胞系后16小時未見明顯細胞病變，但在核周圍檢測到熒光信號證明IPKM對非洲豬瘟病毒強毒株易感。

02 非洲豬瘟接種IPKM后可被檢出：

在病毒感染系數(shù)0.1的情況下接種IPKM細胞系，Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株在接種后2天出現(xiàn)細胞病變，Espana75毒株在接種3天后出現(xiàn)細胞病變。細胞病變呈現(xiàn)為IPKM呈圓形，3至20個細胞聚集呈葡萄狀。

03 病毒生長曲線表明非洲豬瘟病毒在IPKM細胞系上的繁殖速度等于或稍優(yōu)于PAM細胞系

圖1：四個非洲豬瘟毒株在IPKM和PAM細胞系上的生長曲線圖

04 非洲豬瘟病毒在IPKM細胞系上連續(xù)傳代10次后在CP530R區(qū)域發(fā)生一個位點的突變

研究者對Armenia07毒株在IPKM細胞系連續(xù)傳代0、5、10、15代后得到的毒株進行了測序，結(jié)果表明第10代和第15代的毒株在CP530R區(qū)域發(fā)生一個位點的突變。